Page 144 - Educacional Ponenecias Congreso SEHH-STH 2020

Tabla 1. Métodos disponibles para la identificación de mutaciones del gen KIT
Límite de detección
Ventajas
25%
Detecta todas las mutaciones de KIT si secuenciados todos los exones
Cualitativo
0,2%
Detecta todas las mutaciones de KIT si se secuencia todo el gen
Aporta información sobre otras mutaciones
Cuantitativo
1-5%
Simple Rápido Barato
1%
Simple Rápido
< 0,01%
Simple Rápido Barato
Muy sensible
< 0,01%
Simple Rápido
Muy sensible
Método de detección
Secuenciación Sanger
Secuenciación masiva de nueva generación (NGS)
Digestión mediante enzimas de restricción y análisis de fragmentos (RFLP)
PCR con bloqueo de ADN silvestre
PCR cuantitativa específica de alelo (qPCR)
PCR digital
nes en otras posiciones del dominio tirosina cinasa (exones 17 y 18; D820G o N822I/K), y más de 30 mu- taciones diferentes en los dominios extracelulares (exones 8-9), transmembrana (exón 10; F522C) y de yuxtamembrana (exón 11; V560G/I) (Figura 1). En cambio, en niños, donde la mastocitosis es esencial- mente cutánea (MC) y tiende a retroceder espontá- neamente en la pubertad, también se detecta en un 75% de los casos la mutación en KIT pero solo una tercera parte presentan la mutación específica de KIT D816V. Estas mutaciones de las MC infantiles se localizan fundamentalmente en el dominio extrace- lular del receptor, siendo la más frecuente una de- leción en la posición 419(7mostly in exon 17 (D 816 V). En la Figura 1 se describen todas las mutaciones descritas en la MS.
❯ ¿Dónde se origina la mutación?
En una tercera parte de las MSI y prácticamente en todas las MS en fase avanzada, la mutación D816V de KIT está presente además de en los mastocitos, en una o varias líneas celulares hematopoyéticas (CD34+, eosinófilos, monocitos, linfocitos B y neutró- filos). La presentación multilínea se asocia con un mayor riesgo de progresión de MSI a formas más
Desventajas
Baja sensibilidad Laborioso
No es cuantitativo
Sensibilidad media Laborioso
No es cuantitativo No es cuantitativo
Cuantificación relativa Cuantificación absoluta
agresivas de la enfermedad. Además, el 60-80% de los pacientes con MS avanzada presentan signos de proliferación y displasia, y en muchos casos hay asociada una enfermedad hematológica (MS-ANH) de origen mieloide. Las células hematopoyéticas de pacientes afectos de MS-ANH también presentan la mutación de KIT D816V(8). Recientemente, estudios realizados de secuenciación de célula única han de- mostrado la presencia de la mutación KIT D816V en células progenitoras hematopoyéticas(9), sugiriendo un origen clonal común en una célula progenitora hematopoyética con potencial multilínea.
❯ ¿Cómo detectar la mutación?
La determinación de la mutación D816V tiene una especial importancia tanto para el diagnóstico como para la estratificación pronóstica de los pacientes con mastocitosis.
Desde la detección de la mutación se han desa- rrollado y aplicado distintas estrategias y métodos moleculares que se resumen en la Tabla 1. Así, dispo- nemos de: 1) técnicas basadas en la secuenciación de la muestra; 2) métodos basados en el análisis del tamaño de los fragmentos de restricción (RFLP) para la detección de la mutación; y 3) estrategias basadas
LXII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Hematología y Hemoterapia / Ponencias
144