Page 145 - Educacional Ponenecias Congreso SEHH-STH 2020

en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).Así, mientras los métodos de secuenciación convencional apenas detectan la mutación en un 14% de los pa- cientes analizados, el uso de métodos más sensibles incrementa el porcentaje de casos positivos hasta casi el 100% de los pacientes.
Inicialmente, la purificación de los mastocitos de MO mediante citometría de flujo, juntamente con la detección de la mutación mediante técnicas de PCR altamente específicas, permitió la identificación de la mutación incluso en aquellos pacientes que presenta- ban una baja carga de mastocitos patológicos en la MO. En la actualidad, las técnicas de detección aún son más sensibles y es posible detectar la mutación de KIT en SP en la mayoría de los casos de MS.
En la actualidad, las 3 técnicas más utilizadas en el análisis de la mutación KIT D816V son, por una parte, la PCR cualitativa con bloqueo de la amplificación del ADN silvestre mediante una sonda (PNA-PCR) y, por otra, las 2 técnicas cuantitativas que son la PCR cuantitativa específica de alelo (ASO-qPCR) y la PCR digital.
Las técnicas de PCR cuantitativa han sido capaces de detectar la mutación D816V en muestras de SP con sensibilidades inferiores al 0,01%(10-12). Estas 2 tec- nologías se basan en cebadores específicos del alelo de interés (allele specific oligonucleotide –ASO–), por lo que solo de esta forma lograremos la amplificación selectiva del material genético portador de la muta- ción. A su vez, esto tiene como inconveniente el que solo sería posible la identificación de la mutación que estuviésemos buscando (por ejemplo, D816V) en el ensayo. El método de ASO-qPCR utilizado de forma cualitativa (resultado positivo vs. negativo) permitía identificar la presencia de la mutación D816V de KIT en más del 80% de los pacientes(10). Por el contrario, la técnica de PNA-PCR solo fue positiva en menos de la mitad de esas muestras, lo cual confirmaría la mayor utilidad de la ASO-qPCR para la identificación de la mutación D816V de KIT. La cuantificación del porcentaje de células portadoras de la mutación permite predecir con elevada eficiencia el grado de afectación de la hematopoyesis medular por la mu- tación. La presencia de afectación multilineal de la hematopoyesis se asocia con niveles más elevados de células portadoras de la mutación en SP. Un re- sultado negativo, especialmente cuando se observa en pacientes con síntomas de activación mastocita- ria (por ejemplo, anafilaxia), en ausencia de lesiones
cutáneas (MSI–), debe ser corroborado con un análi- sis de MO, ya que la mutación de KIT está restringida a los mastocitos anómalos y estos son poco abun- dantes.
Se han sugerido distintos puntos de corte de la car- ga tumoral para definir los diferentes grupos pronós- ticos. Se ha definido una carga tumoral del 2% para estratificar a los pacientes teniendo en cuenta la su- pervivencia(11) y una carga tumoral del 6% en SP para discriminar si la mutación se halla restringida en mas- tocitosis o no(10). Basado en estos estudios, la European Competence Network on Mastocytosis (ECNM) ha su- gerido que el análisis de la mutación de KIT D816V en SP debe utilizarse como el primer screening en pa- cientes con sospecha de MS conjuntamente con el análisis de los niveles de triptasa sérica para el diag- nóstico de las MSI (Figura 2)(13).
Recientemente, se ha demostrado que el análisis cuantitativo por PCR digital en biopsias de MO fija- das en formol e incluidas en parafina presenta una muy buena correlación de la carga tumoral con la infiltración de mastocitos en MO y que puede ser un método muy sensible en los casos de MSI(14). Se propone que un punto de corte del 9% identifica 2 subgrupos clínicamente distintos analizados en las muestras de MO.
❯ Mutaciones adicionales en la mastocitosis
Los estudios de secuenciación masiva han detectado mutaciones adicionales en la MS. Así, un 5-10% de los casos de MSI progresarán a formas más avanzadas y estas estarán asociadas a un peor pronóstico.Tenien- do en cuenta en qué línea celular se detecta la muta- ción de KIT D816V y la presencia de otras mutaciones, la MS se puede subclasificar en 3 grupos. La mayoría de las MSI presentarán mutación de KIT D816V solo en mastocitos; la mutación se hallará en multilínea en el 11% de las MSI sin lesiones de piel, en un 37% de las MSI con lesiones de piel y en la casi totalidad de las MS agresivas. Más del 90% de las MS agresivas ade- más presentarán otras mutaciones somáticas. Se ha descrito que un 17% de las MSI presentan mutaciones adicionales; en particular, la presencia de mutaciones en ASXL1, RUNX1 y/o mutaciones en DNMT3a (A/R/D) con una frecuencia alélica (VAF) de más del 30% es el único predictor independiente de supervivencia glo- bal de las MSI(15).
LXII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Hematología y Hemoterapia / Ponencias
145